固定是组织学制片的关键步骤，为的是使欲观察的组织构造尽量接近它取材前的状态，使组织离体或死亡后不发生变化，细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分被转变为不溶性物质，避免自溶与腐败，并且令组织块硬化便于制片，同时能使各组分产生不同的折光率及对不同染料的亲和力，便于观察鉴别。因此标本取材后需及时放入固定液中，10%福尔马林溶液因其渗透力强、固定均匀、对组织收缩较少的特点，成为常规固定液。固定依标本大小决定浸泡时间，大标本可剖开固定。 因组织中含有较多水分，且水和石蜡不能互相溶解，因此不能直接进行石蜡包埋，还需经过某些溶剂逐步将组织块中的水分置换出来。脱水剂中最常用的是酒精。从75%酒精开始，逐步升高酒精浓度，直至无水乙醇。脱水时间应根据组织块的种类、大小及使用的固定液种类等因素而定。例如：45℃条件下，依次将标本浸泡于75%酒精、95% 酒精、无水乙醇I、无水乙醇II ,每道试剂浸泡30min。 大多数脱水剂不能与石蜡相溶，因此石蜡仍不能进入组织并包埋成供切片用的蜡块。为此，还需要一种桥梁作用的溶剂，既能溶于脱水剂又能和包埋剂相溶，以便逐步将脱水剂置换成包埋剂。二甲苯是石蜡包埋中最常用的透明剂，不溶于水，易溶于无水乙醇，也是石蜡的溶剂。它的折光率为1.497，透明能力强但易使组织收缩变脆，因此不宜久留。例如：45℃条件下，二甲苯I中浸泡15min；二甲苯II中浸泡15min。为减少组织块过度收缩，可在无水乙醇之后，设一道乙醇二甲苯混合液。 浸蜡是指透明过的组织块在熔化的石蜡中浸渍的过程。目的是用石蜡代替二甲苯，在随后的包埋中，由液态转变成固态，使整个组织具有均匀一致的固态结构和足够的硬度，以便切片机切片。浸蜡一般需要2-3h。 最常用的石蜡切片机是轮转式切片机，切片厚度在3 μm-5 μm之间，依组织细胞密度、细胞大小调整切片厚度。 切片制成后，虽然能在光镜下隐约分辨出一些组织轮廓，但要很好的辨别它的细微结构是很困难的。HE染色是组织学中常规制片最基本也是应用最广泛的染色方法，用HE染色能显示各种组织的正常结构特点和病理时病变的发生、发展及修复情况，而且染色的切片存放时间长，因此很适用于观察、诊断或研究，在生物学和医学领域的教学、 科研、病理诊断等工作中有着不可或缺的作用。常用方法：烘片后二甲苯I 5min,二甲苯II 5min,二甲苯III 5min, 无水乙醇1min, 95%酒精1min, 75%酒精1min,自来水冲洗数秒逐步脱蜡至水，然后苏木素染3min,自来水冲洗数秒，分化液分化数秒后自来水冲洗返蓝，伊红染液染30s后逐步脱水，75%酒精30s, 95%酒精30s,无水乙醇 30s；然后用二甲苯透明1min。稍干后用中性树胶封片，晾干。 |
