骨组织处理及H&E染色方法

骨组织处理及H&E染色方法

1、固定：组织固定过夜。

2、脱钙：脱钙液（EDTA）脱钙，每周换新液，约两周。（可用针刺一下骨组织，若无阻力感则脱钙完成。）

EDTA配方：pH为7.0~7.4

3、脱水：室温下①75%酒精浸泡3h；②95%酒精过夜；③无水乙醇Ⅰ浸泡45min；④无水乙醇Ⅱ浸泡45min；

4、透明：①二甲苯Ⅰ浸泡30min；②二甲苯Ⅱ浸泡30min；

5、浸蜡：将温度设置在略高于固体石蜡熔点，①蜡Ⅰ浸泡1.5h；②蜡Ⅱ浸泡1.5h；

6、包埋：通常以最大切面向下；

7、切片：采用石蜡切片机切片，厚度在3um~5um之间，依组织细胞密度、细胞大小决定厚度。

8、H&E染色：①脱蜡至水：二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，二甲苯Ⅲ5min，无水乙醇1min，95%酒精1min，75%酒精1min，自来水冲洗数秒；②染色：苏木素染3min，自来水冲洗数秒，分化液分化数秒后自来水冲洗返蓝，伊红染液染30s；③脱水：75%酒精30s，95%酒精30s，无水乙醇30s；④透明：二甲苯1min。

9、封片：中性树脂封片，晾干。

*以上所有试剂浸泡时间依试剂新旧程度、气温、标本大小、组织性质调整。脱钙液品种繁多，各有利弊。