1）抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索最佳浓度。

2）抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是最佳的时间和次数。若不行，还可高压修复。

3）组织切片本身这种抗原含量低；

4）血清封闭时间过长。

5）DAB孵育时间过短。

6）细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

7）开始做免疫组化，一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。