组织固定、包埋、H&E染色方法 来源:苏州堪赛尔医学检验有限公司 发布时间:2021-08-08 1、固定:取材后标本及时置于10%福尔马林溶液中浸泡,依标本大小决定浸泡时间,大标本可剖开固定。2、脱水:室温下①75%酒精浸泡3h;②95%酒精过夜;③无水乙醇Ⅰ浸泡45min;④无水乙醇Ⅱ浸泡45min; 45℃下①75%酒精浸泡30min;②95%酒精30min;③无水乙醇Ⅰ浸泡30min;④无水乙醇Ⅱ浸泡30min。根据组织大小、类型适当调整时间。3、透明:室温下①二甲苯Ⅰ浸泡30min;②二甲苯Ⅱ浸泡30min; 45℃①二甲苯Ⅰ浸泡15min;②二甲苯Ⅱ浸泡15min。根据组织大小、类型适当调整时间。4、浸蜡:将温度设置在略高于固体石蜡熔点,①蜡Ⅰ浸泡1.5h;②蜡Ⅱ浸泡1.5h;5、包埋:通常以最大切面向下;用镊子轻压平整。6、切片:采用石蜡切片机切片,厚度在3um~5um之间,依组织细胞密度、细胞大小决定厚度。7、H&E染色:①脱蜡至水:二甲苯Ⅰ5min,二甲苯Ⅱ5min,二甲苯Ⅲ5min,无水乙醇1min,95%酒精1min,75%酒精1min,自来水冲洗数秒;②染色:苏木素染3min,自来水冲洗数秒,分化液分化数秒后自来水冲洗返蓝,伊红染液染30s;③脱水:75%酒精30s,95%酒精30s,无水乙醇30s;④透明:二甲苯1min。8、封片:中性树脂封片,晾干。*以上所有试剂浸泡时间依试剂新旧程度、气温、标本大小、组织性质调整。标本需完全浸泡在试剂中,每换到下一道试剂时尽量将前一道试剂沥干。若脱水透明过程中将标本从无水乙醇换至二甲苯时,二甲苯变浑浊,则提示无水乙醇中水分含量较多,脱水未彻底,需更换试剂后重新脱水。更换试剂时,75%酒精弃去,将95%酒精缸中酒精倒入75%缸中代替,无水乙醇Ⅰ倒入95%中,以此类推,节约试剂。 上一条:免疫组化染色方法(SP法) 下一条:没有下一条记录了