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免疫组化染色方法(SP法)
来源:苏州堪赛尔医学检验有限公司         发布时间:2016-09-19
实验步骤:

1、石蜡切片烘箱烤片、脱蜡和水化后,用PBS<pH7.4>冲洗3次,每次3min。并对组织进行抗原修复(枸橼酸盐缓冲液<pH6.0>、微波高火5min、两次,第二次修复前需冷却至室温)。
 2、每张切片滴加过氧化酶阻断溶液,室温下孵育10min以阻断内源性过氧化物酶的活性。用PBS冲洗3次,每次3min。
 3、除去PBS液,每张切片滴加正常非免疫动物血清,室温下孵育10min。
 4、除去血清,每张切片滴加第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜。PBS冲洗3次,每次3min。
 5、除去PBS液,每张切片滴加生物素标记的第二抗体,室温下孵育10min后,用PBS冲洗3次,每次3分钟。
 6、除去PBS液,每张切片滴加链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液,室温下孵育10min后,用PBS冲洗3次,每次3min。
 7、除去PBS液,每张切片滴加新鲜配制的DAB溶液,显微镜下观察3~10min。
 8、自来水冲洗,苏木素复染,自来水冲洗返蓝,经梯度酒精脱水干燥、二甲苯透明后,中性树胶封固。

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