1、石蜡切片烘箱烤片、脱蜡和水化后，用PBS<pH7.4>冲洗3次，每次3min。并对组织进行抗原修复（枸橼酸盐缓冲液<pH6.0>、微波高火5min、两次，第二次修复前需冷却至室温）。
 2、每张切片滴加过氧化酶阻断溶液，室温下孵育10min以阻断内源性过氧化物酶的活性。用PBS冲洗3次，每次3min。
 3、除去PBS液，每张切片滴加正常非免疫动物血清，室温下孵育10min。
 4、除去血清，每张切片滴加第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜。PBS冲洗3次，每次3min。
 5、除去PBS液，每张切片滴加生物素标记的第二抗体，室温下孵育10min后，用PBS冲洗3次，每次3分钟。
 6、除去PBS液，每张切片滴加链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育10min后，用PBS冲洗3次，每次3min。
 7、除去PBS液，每张切片滴加新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3~10min。
 8、自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返蓝，经梯度酒精脱水干燥、二甲苯透明后，中性树胶封固。