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骨组织处理及H&E染色方法
来源:苏州堪赛尔医学检验有限公司         发布时间:2016-09-28

骨组织处理及H&E染色方法

1、固定:组织固定过夜。

2、脱钙:脱钙液(EDTA)脱钙,每周换新液,约两周。(可用针刺一下骨组织,若无阻力感则脱钙完成。)

EDTA配方:pH为7.0~7.4

EDTA、钠盐

250g

蒸馏水

1750ml

3、脱水:室温下①75%酒精浸泡3h;②95%酒精过夜;③无水乙醇Ⅰ浸泡45min;④无水乙醇Ⅱ浸泡45min;

4、透明:①二甲苯Ⅰ浸泡30min;②二甲苯Ⅱ浸泡30min;

5、浸蜡:将温度设置在略高于固体石蜡熔点,①蜡Ⅰ浸泡1.5h;②蜡Ⅱ浸泡1.5h;

6、包埋:通常以最大切面向下;

7、切片:采用石蜡切片机切片,厚度在3um~5um之间,依组织细胞密度、细胞大小决定厚度。

8、H&E染色:①脱蜡至水:二甲苯Ⅰ5min,二甲苯Ⅱ5min,二甲苯Ⅲ5min,无水乙醇1min,95%酒精1min,75%酒精1min,自来水冲洗数秒;②染色:苏木素染3min,自来水冲洗数秒,分化液分化数秒后自来水冲洗返蓝,伊红染液染30s;③脱水:75%酒精30s,95%酒精30s,无水乙醇30s;④透明:二甲苯1min。

9、封片:中性树脂封片,晾干。

*以上所有试剂浸泡时间依试剂新旧程度、气温、标本大小、组织性质调整。脱钙液品种繁多,各有利弊。

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